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脑、神经系统细胞系鉴定即通过STR(短串联重复)图谱所建立细胞系的遗传特征。一株细胞系的遗传特征确立后,细胞系可以通过定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。
为什么要做细胞系鉴定?
目前,科学家们进行生物医药的研究大都通过培养细胞来开展,而所用的细胞可能是受赠于其它实验室的研究人员,也可能是从细胞库(例如:美国ATCC等)得来。据粗略估计,15-20%的实验室,实验中所使用的细胞已经不是原来的细胞系,或者与其它细胞系发生了交叉污染。显然,细胞系遭到污染或特征鉴别错误,将会导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗失败等,这极大的威胁着基于这些细胞而开展的研究发现的正确性以及发表论文的严谨性,造成难以挽回的人力、时间和金钱的极大浪费。 什么是细胞系鉴定?
脑、神经系统细胞系的说明
细胞株名称:F98大鼠脑胶质瘤细胞 种属:大鼠 组织来源:胶质瘤,脑,胶质细胞 生长特性:贴壁生长
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培养条件: | 完全培养基:DMEM高糖+10%FBS+1%P/S 培养条件:37℃ carbon dioxide(CO2),5%
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传代方法: | 收到细胞后,取出培养瓶在显微镜下观察细胞生长情况。 (一)如果细胞未超过80%汇合度时,用75%酒精喷洒整个瓶身消毒后放到超净台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。 ( 二)如果细胞已超过80%汇合度时,可根据情况进行传代培养。具体步骤如下:1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)润洗1-2次。2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置37℃培养箱中1-3分钟预热,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5ml培养基的新皿中或者培养瓶中。 5. 2-3天换液一次。注意:收到细胞后将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理,以稳定细胞状态。传代后细胞应该用新鲜的培养液,原瓶的培养液不能再使用。在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落,可离心吹打后重新种入瓶中培养。(收到细胞后3天内发现细胞异常请及时拍照并联系)
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冻存方法: | 冻存液:90%完全培养液,10%DMSO 储存:液氮储存
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