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ATCC细胞基本操作程序

发布时间:2022-05-23 点击量:28
   ATCC细胞通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
  细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞zui易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
  ATCC细胞操作程序(ATCC说明书有关于细胞复苏和传代的详细步骤)
  1、细胞实验室进行常规消毒,紫外照射40min以上。
  2、培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min,备用。
  3、二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,备用。
  4、从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入400C水浴中,快速摇晃,直至冻存液完全融化。
  5、将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。
  6、用培养液悬液混悬沉淀细胞,调整细胞浓度,方培养箱中培养。
  7、记录复苏日期。
  ATCC细胞注意事项:
  1、常规细胞培养仪器设备 恒温水浴振荡器。
  2、培养液(DMEM)胎牛血清(CBS)二甲基亚砜(DMSO)。
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