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养好细胞注意点

发布时间:2021-10-26 点击量:259

养好细胞注意点(二)

(一)何时须更换培养基。培养基中是否须添加抗生素。


视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上的更换时间,按时更换培养基即可。


一般正常培养状态下,培养基中可以添加抗生素。 按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 μ/mL。


(二)贴壁细胞传代时所使用的 trypsin-EDTA 浓度及相应处理


一般使用的 trypsin-EDTA 浓度为 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于 –20 ℃,避免反复冷冻解冻造成 trypsin 的活性降低,并可减少污染的机会.。


(三)将一般动物细胞离心下来,离心速率多少


回收动物细胞,其离心速率一般为 1 000 rpm,5~10 分钟,过高的转速,将造成细胞死亡。


(四)细胞的接种密度


依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。


(五)细胞冷冻培养基的成分及DMSO的等级


动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含 5~10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和 90~95 % 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意:由于 DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将 DMSO 直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。冷冻保存使用的 DMSO 等级,必须为 Tissue culture grade 的 DMSO ,其本身即为无菌状况,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中避光保存。


(六)冷冻保存细胞的方法及冷冻细胞浓度


将贴壁细胞消化后离心收集,悬浮细胞直接离心收集,以含有DMSO完全培养基或胎牛血清的冻存液重悬细胞至终浓度约1x106/ml。。以每管1~2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 


冷冻管内细胞数目一般为 1x106 cells/ml vial,融合瘤细胞则以 5x106 cells/ml vial 为宜。


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